La cytométrie


En pathologie tumorale, l'étude cytométrique consiste à quantifier des paramètres de forme et/ou de densité de marqueurs parmi lesquels le contenu en ADN des cellules ou de substances liées à l'activité proliférative.

Deux techniques sont utilisées : la cytométrie en flux (CMF) et la cytométrie par analyse d'images (CAI).

La cytométrie de flux étudie le cycle cellulaire.

Le cycle cellulaire normal comprend quatre grandes phases :

Le cycle cellulaire


Par opposition à ces 4 phases propres aux cellules cyclantes, il existe une autre phase, la phase G0 (mêmes caractéristiques que G1 mais la cellule ne se divise pas). Il s'agit d'un état post-mitotique transitoire (cellules souches ou différenciées recrutables) comme pour les lymphocytes ou permanent (cellules vouées à une différenciation poussée puis à la mort cellulaire programmée à plus ou moins longue échéance) comme pour les neurones.

La cytométrie en flux est une technique qui consiste à faire défiler des cellules dissociées et préalablement marquées par un fluorochrome (iodure de propidium) devant un faisceau laser.

Les signaux optiques sont captés par différents photomultiplicateurs puis convertis en signaux analogiques analysables en informatique. Plus de 10000 cellules tumorales sont analysées, ce qui permet une étude quantitative de l'ADN (ploïdie) des cellules tumorales et de la phase de synthèse (S) calculée à l'aide de logiciels.

Photo de l'appareillage
 
Schéma de la cytométrie de flux

Les résultats sont visualisés sur des histogrammes .

Plusieurs types d'histogrammes sont possibles dans les tumeurs :

Exemples de pics de cytométrie
Tracés pathologiques

La Cytométrie par Analyses d'Images permet une quantification du contenu en DNA à partir de noyaux cellulaires dissociés étalés sur lames et colorés au Feulgen. Après acquisition microscopique automatisée, 200 à 1000 noyaux peuvent être analysés à l'aide de logiciels informatiques afin de déterminer la ploïdie.

Appareillage d'analyse d'imagess
Equipement au CFB
Etude de cellules dissociées
Exemple de cellules étudiées
L'analyse quantitative des cellules observées
Etude mathématique
Etude de la répartition dans le cycle
Analyse du cycle cellulaire
 
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