Hybridation in situ

Le principe de l'hybridation in situ (HIS) consiste à hybrider sur une coupe tissulaire une séquence spécifique d'acide nucléique (ADN ou ARN) et une séquence complémentaire d'acide nucléique marqué (sonde) pour réaliser une molécule double brin stable.

Cette technique a une très forte spécificité mais est peu sensible du fait des difficultés d'accessibilité de la sonde vers sa cible.

La séquence recherchée doit donc être en grande quantité importante et la qualité de la technique irréprochable.

Schéma théorique de l'hybridation in situ

Les réactions sont réalisables sur coupes congelées ou sur coupes en paraffines préalablement fixées.

Cinq étapes sont requises :

• déparaffinage/réhydratation ( pour les coupes en paraffine

• perméabilisation du tissu (protéinase K)

• dénaturation des protéines ( du bruit de fond)

• hybridation sur la nuit avec sonde ARN simple brin ou oligonucléotide de synthèse marqué (marqueur isotopique ou non isotopique)

• révélation

Les indications en pathologie concernent essentiellement la recherche de virus.

En cancérologie, l'Hybridation In Situ est utile pour :

• La recherche d'EBV dans certains lymphomes et le carcinome indifférencié du nasopharynx,

• La recherche de clonalité dans les lymphomes,

• La recherche de cycline D1.

Hybridation in situ dans unelésion de l'hypopharynx: Sonde EBV